Способ иммуногистохимического окрашивания

Раздел онкологии требует использования эффективных современных методик диагностики заболеваний. Дело в том, что указанный раздел медицины занимается изучением, диагностикой и лечением одного из сложнейших комплексов заболеваний. Онкологические расстройства несут серьезную угрозу жизни человека и требуют объемных затрат для эффективного и своевременного устранения.

Одним из ведущих направлений дифференциальной диагностики злокачественных опухолей является иммуногистохимия. Это направление сегодня широко используется для исследования динамики, характера и потенциала антигенных клеток. Для объективной оценки биологического характера и потенциала чужеродных клеток применяется метод иммуногистохимического окрашивания.

При помощи такой методики практически наверняка можно определить:

• Темп роста опухолевых клеток;
• Прогноз дальнейшего разрастания опухолевого процесса;
• Возможные сценарии реакции на химиотерапию и некоторые другие виды лечения (гормональная терапия);
• Фенотипирование опухолей;

Применение иммуногистохимического окрашивания позволяет исключить необходимость проведения других более затратных и иногда менее информативных диагностических исследований. Указанную методику можно назвать уточняющей. Ведь при некоторых патологических состояниях достаточно сложно выделить особенности основных патологических процессов и с точностью определить морфологию злокачественных тканей. Также не всегда, получается выявить подлинный возбудитель, спровоцировавший болезнь. В таких и прочих сходных случаях на помощь приходят дополнительные методики исследований, позволяющие детализировать особенности того или иного патологического процесса. Означенная методика предполагает очень широкие возможности в медицинских исследованиях. На сегодняшний день потенциал способа раскрыт не полностью. Важнейшие открытия в указанном направлении еще впереди.

Помощь иммуногистохимии в постановке диагноза

Иммуногистохимические исследования

Основные принципы методики

В основе рассматриваемой методики развернутой диагностики лежит получение информативной иммунологической реакции антигена на определенные антитела. Подобный подход позволяет произвести идентификацию тканей и основных антигенов. Благодаря связке с антигенами вполне возможно получить требуемый результат во многих вариациях исследований.

Использование специфических антител также лежит в основе визуализации многих молекулярных образований:

• Рецепторы поверхности клетки;
• Гормоны, иммуноглобулины, ферментативный ряд;
• Структурные клеточные компоненты.

Принцип означенной методики заключается в нанесении растворенных антител на гистологические образцы, и сочетании их с искомыми антигенами (микробными, вирусными, онкологическими, аутоиммунными). Обычная гистологическая окраска в таких случаях не дает требуемой визуализации антигенов. Антитела в сыворотках отличаются специфической меткой (флуоресцентной или ферментативной). Если антиген, присутствие которого предполагается обнаружить в тканях, присутствует, то сочетание антитело плюс антиген и маркер укажут на его точное наличие. Локализация и интенсивность окрашивания помогут распознать характер опухолевого образования, его тип. При помощи указанной методики легко изучить все свойства опухоли.

Общее описание хода процесса

Для проведения указанного исследования используются специально приготовленные образцы тканей, взятые при биопсии или после операционного вмешательства. Важно отметить, что образцы для исследований должны забираться до начала лечения. В противном случае результаты могут быть значительно искажены. После забора образцов тканей из материала, предназначенного для исследования, изготавливают гистологические (иногда цитологические) срезы.

Иммуногистохимическое окрашивание срезов длится примерно 4-5 часов. За этот период осуществляются все требуемые этапы окрашивания:

• Фиксация срезов в специальном растворе (например, ацетон);
• Процесс взаимодействия антител и антигенных структур тканей;
• Первая промывка и инкубация;
• Промывка в дистиллированной воде;
• Контрастирование и бальзамирование.

Стоит указать, что инкубация срезов со смесью первичных и вторичных антител в некоторых случаях проводится практически сразу. Между манипуляциями делается пятнадцатиминутный перерыв. В других вариантах способа инкубация проводится в несколько этапов.

Важно отметить, что на практике используется несколько вариаций способа иммуногистохимического окрашивания. Первый известный метод – прямой иммунофлюорисцентный. Второй метод – непрямой пероксидазный. Изначально было принято использовать прямую методику. Но, с появлением непрямого способа информативность такого окрашивания повысилась в разы. Так произошло по той причине, что меченые ферментом вторичные антитела связываются с первичными антителами, которые идут в сочетании с антигенами.

Сегодня методики значительно расширились. Современная медицина имеет возможность осуществления лабораторных исследований с использованием методик нового поколения.

Оценка и учет исследований

Для того чтобы произвести оценку и изучение полученных с использованием иммуногистохимического окрашивания образцов применяется специальный микроскоп высокого уровня. Для объективного анализа полученного изображения и архивации данных для последующего наблюдения за динамикой используется цифровая фотокамера и компьютер. Оцифрованные изображения образцов можно подвергать дополнительному исследованию при помощи специализированных программ.

Инструмент и оборудование

Для проведения рассматриваемого диагностического метода исследования используется как традиционное гистологическое оборудование, так и ряд специальных инструментов и приборов.

Для проведения ИГХ-окрашивания необходим следующий перечень инструментов и оборудования:

• Аппарат гистологической проводки микропрепаратов;
• Аппарат для осуществления парафиновой заливки;
• Микротом;
• Микроскоп, предметные и покрывные стекла;
• Емкости для окрашивания;
• Оборудование для регидрации и депарафинизации;
• Контейнер для термической обработки материала;
• Оборудование для термообработки;
• Пипеточные дозаторы и набор наконечников к ним;
• Специальный гидрофобный карандаш;
• Измеритель уровня рН;
• Термостат;
• Холодильник для хранения препаратов.

В зависимости от выбранной методики проведения иммуногистохимического окрашивания вариативное сочетание оборудования и инструментов может изменяться, дополняться или допускать некоторые исключения.

Выполнение важных задач

В настоящее время описываемая методика применяется для точной диагностики злокачественных заболеваний. Иммуногистохимическое окрашивание дает возможность подтвердить диагноз за счет получения наглядной морфологической картины. При неясной морфологии эта методика предусматривает возможность определения точного гистогенеза.

Рассматриваемый способ особенно эффективен в случаях утраты клеток своих морфологических стандартных качеств из-за развития различных опухолевых процессов, при возникновении метастазирования, в вариантах присутствия новообразований недефференцированной мелкоклеточной и плоскоклеточной природы.

В результате многочисленных исследований, проведенных в направлении онкологии, ученые обнаружили, что в злокачественных тканях имеются определенные показатели. Они указывают на дальнейшие прогнозы развития новообразования и возможные реакции опухоли на различного типа воздействие. Для визуализации подобных особенностей раковых опухолей и проводится подобное исследование.

Методы диагностики нового поколения позволяют глубинно исследовать заболевания онкологической природы. Это, в свою очередь, открывает большие перспективы в направлении новейших разработок, направленных на диагностику, изучение и выбор методов профилактики и лечения.

Применение описанной диагностической методики практически исключает ошибочную диагностику и позволяет ответить на многочисленные вопросы, возникающие в ходе лечения и наблюдения динамики развития заболевания.